ENTREVISTA - Ficha Técnica: Célio Lopes Silva - Farmacêutico - Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo, 1976. Mestre em Bioquímica - Departamento de Bioquímica do Instituto de Química da Universidade de São Paulo, 1978. Doutor em Bioquímica - Departamento de Bioquímica do Instituto de Química da Universidade de São Paulo, 1981. Professor Livre-Docente em Microbiologia Médica pela Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, 1986. Pós-doutorado na área de Biologia Molecular, no National Institute for Medical Research, em Londres, Inglaterra, entre 1989 e 1991. Cargos atuais: Membro Titular da Academia Brasileira de Ciências. Professor Titular de Imunologia da FMRP-USP. Coordenador do Centro de Pesquisas em TB da FMRP-USP. Membro do Comitê Assessor do Programa Nacional de Controle da TB do Ministério da Saúde, desde 2003. Membro efetivo e consultor da OMS para a área de vacinas.

Biotec Pra Galera - Qual a diferença entre a BCG, vacina que já é usada há bastante tempo na prevenção da tuberculose, e a vacina gênica?

Célio Lopes Silva - A BCG é uma vacina que contém o bacilo Mycobacterium bovis vivo e atenuado. Portanto, é uma vacina que contém centenas ou milhares de componentes. A vacina gênica em desenvolvimento pelo nosso grupo contém a mensagem genética (gene) para expressão (fabricação dentro da célula do indivíduo vacinado) de uma única proteína antigênica.

Biotec Pra Galera - Na vacina é usado todo o material genético da bactéria ou apenas uma parte dele?

Célio - Apenas o gene que expressa a proteína hsp65 de micobactérias.

Biotec Pra Galera - Para que a vacina gênica fosse desenvolvida, houve o mapeamento genético do bacilo de Koch, a bactéria causadora da tuberculose?

Célio - A vacina foi desenvolvida antes do mapeamento genético do bacilo de Koch. Já sabíamos que a proteína hsp65 de micobactérias era um dos melhores antígenos para estimular o sistema imunológico de animais de experimentação e do homem. Quando iniciamos o projeto em 1990, já tínhamos o gene, que codifica a proteína hsp65, já clonado. Portanto, foi uma obra de engenharia genética, pegando o respectivo gene e realizando uma clonagem em vetor plasmideal adequado. Esse plasmídeo, que carrega o gene hsp65, foi colocado dentro de uma bactéria Escherichia coli para produção do plasmídeo em grande quantidade e depois purificado. Esse plasmídeo purificado se constitui na vacina gênica propriamente dita.

Biotec Pra Galera - A vacina gênica pode ser usada de modo terapêutico, em pacientes que já estejam com a doença?

Célio - A vacina gênica foi utilizada no tratamento da doença, em conceito diferente em relação às vacinas convencionais, que são utilizadas somente como prevenção à instalação da doença. Essa vacina de DNA cura a infecção, cura a doença estabelecida e impede que ocorra a reativação da doença, sem perder a sua característica profilática. Os benefícios práticos e estratégicos resultantes do desenvolvimento dessa vacina com atividade terapêutica contra a tuberculose são inúmeros. Ela é segura, eficaz, pode ser dada em uma única dose, estimula amplamente a resposta imunológica, tem efeito protetor duradouro e pode contribuir significativamente para a diminuição da incidência da doença e talvez a sua erradicação.
(*Para saber mais sobre a vacina gênica, leia texto abaixo, ao final da entrevista)

Biotec Pra Galera - A tuberculose é uma das doenças recorrentes em pacientes com Aids. Eles também poderiam receber a vacina gênica contra tuberculose ou há contra-indicações?

Célio - Achamos que ela seria benéfica para a cura dos pacientes com Aids. Estamos propondo no momento, um ensaio clínico para pacientes coinfectados, ou seja, portadores da tuberculose e da Aids.

Biotec Pra Galera - Já foram feitos testes em humanos com a vacina?

Célio - Foram feitos para tratamento (imunoterapia) de pacientes com câncer e com bastante sucesso.

Biotec Pra Galera - A técnica de desenvolvimento de vacinas gênicas pode ser usada contra doenças causadas por vírus também?

Célio - As vacinas gênicas têm amplas aplicações: doenças infecciosas em geral (bactérias, vírus, fungos, parasitas), alérgicas, autoimunes e câncer.

Biotec Pra Galera - Já há alguma outra vacina gênica disponível?

Célio - Em uso ainda não. Dados da literatura mostram que existem em torno de 150 vacinas gênicas em ensaios clínicos atualmente. Algumas em fase III.

Biotec Pra Galera - Em quanto tempo se espera que a vacina gênica contra tuberculose esteja disponível?

Célio - Se depender dos órgãos financiadores de pesquisa e de empresas vai demorar muito - faltam recursos para ensaios clínicos (aparentemente ela não é prioritária para os órgãos de saúde).

ATIVIDADE TERAPÊUTICA DA VACINA DNA HSP65

Até recentemente, não havia perspectivas de se eliminar o bacilo da tuberculose do grande número de indivíduos infectados - um terço da população mundial. O bacilo aloja-se com maior freqüência no pulmão, por tempo indefinido, mas pode infectar outros órgãos permanecendo contido pelas células de defesa do organismo. Em decorrência da diminuição da resistência orgânica (desnutrição, subnutrição, estresse ou associação de outras doenças), o bacilo tende a se reproduzir intensamente e pode levar o indivíduo à morte, caso não seja devidamente tratado.

A partir dessa fase de reprodução, considera-se instalada a doença, podendo ocorrer a contaminação de outras pessoas. A doença pode provocar graves lesões que perduram mesmo após o extermínio do bacilo, causando grande sofrimento ao paciente. Desenha-se um quadro de aumento da letalidade da tuberculose, que precisa ser equacionado com rapidez nos próximos anos. Assim, a evolução de um modelo adequado de combate ou controle da tuberculose é uma necessidade iminente.

Nossos experimentos têm mostrado que a administração da vacina DNAhsp65, em animais previamente infectados com M. tuberculosis virulenta, não só previne o desenvolvimento da doença como também elimina a infecção. Além disso, a vacina tem a propriedade de cura mesmo quando administrada em estados mais avançados da doença ou após sua disseminação por todo o organismo do animal. A infecção por M. tuberculosis faz com que o sistema imunológico dos animais passem a não responder contra o agente agressor e permite o crescimento acelerado dos bacilos e o estabelecimento da doença.

Nessas condições a terapia gênica com a vacina de DNA hsp65 permitiu uma mudança radical e profunda da resposta imunológica, passando de um padrão imunossuprimido (Th2) para um padrão imunoprotetor (Th1), criando condições para o organismo combater os bacilos e curar a doença, mesmo sem a administração de quimioterápicos antimicobacterianos. Esta foi a primeira demonstração de que uma vacina gênica seja capaz de curar uma doença infecciosa e o trabalho foi publicado na revista Nature, que tem um dos maiores índices de impacto no meio científico.

IMUNOTERAPIA DA TUBERCULOSE MULTI-DROGA RESISTENTE
Um dos problemas mais sérios relacionados com o controle da TB é o aparecimento de bacilos que apresentam resistência a vários medicamentos utilizados no tratamento como a isoniazida, a pirazinamida, a estreptomicina e a rifampicina, dentre outros. Já foram isolados bacilos que são resistentes não só a um desses medicamentos como também a combinações de dois, três e mesmo a todos ao mesmo tempo. Mais recentemente surgiram na África os bacilos extremamente resistentes, que estão causando grandes preocupações nos órgãos de controle da TB. Esses pacientes, portadores de bacilos denominados multidrogaresistentes, contam com poucas alternativas de tratamento e, às vezes, com nenhuma opção. Nossos trabalhos recentes mostraram que animais infectados com bacilos resistentes a essas drogas também são curados pela administração da vacina gênica.

IMUNOTERAPIA DA TUBERCULOSE LATENTE
Outro problema associado ao alto índice de indivíduos infectados correlaciona-se com o alto grau de adaptação dos bacilos ao homem. A infecção normalmente se estabelece após a inalação dos bacilos e entrada dos mesmos nas células de defesa do organismo. Dentro dos macrófagos, que são células com alto potencial microbicida, os bacilos têm a habilidade de desativar seus sistemas de defesa e conseguem sobreviver e se multiplicar no seu interior. O sistema de defesa imune do homem identifica a presença dos bacilos e estabelece uma resposta contra os mesmos, caracterizada por uma reação inflamatória crônica e granulomatosa que tem a finalidade de circunscrever e delimitar a infecção.

Nestas condições, os bacilos podem sobreviver por anos em estado de latência ou dormência e o indivíduo infectado pode não manifestar a doença. A doença manifesta-se quando há um desequilíbrio dessa relação mútua e está freqüentemente associada com estados de supressão da resposta imunológica. Entre os casos mais comuns de imunossupressão associados com a tuberculose estão os indivíduos com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), estressados, que utilizam fármacos imunossupressores, dependentes químicos (como os dependentes de álcool) e desnutridos, dentre outros.

O estado de latência ou dormência das micobactérias, que podem sofrer uma reativação e manifestar a doença em estados de imunossupressão, também foi analisado com o uso da terapia gênica. Foi desenvolvido um modelo experimental em camundongos que mimetiza as condições observadas no desenvolvimento da doença humana em indivíduos imunossuprimidos. Nos grupos de animais controle, que não foram vacinados (infectados, tratados com fármacos antibacterianos para estabelecer um estado de latência e tratados com corticosteróide para causar imunossupressão), observou-se reativação da infecção e estabelecimento da doença. Nos grupos experimentais que foram tratados com a vacina de DNA, não foram observados reativações e desenvolvimento da doença, principalmente quando foram administradas três doses da vacina. A eliminação das bactérias dormentes pela vacina de DNA pode trazer benefícios significativos para o controle da TB e mesmo a sua erradicação.

A vacina gênica foi utilizada no tratamento da doença, em conceito diferente em relação às vacinas convencionais, que são utilizadas somente como prevenção à instalação da doença. Essa vacina de DNA cura a infecção, cura a doença estabelecida e impede que ocorra a reativação da doença, sem perder a sua característica profilática. Os benefícios práticos e estratégicos resultantes do desenvolvimento dessa vacina com atividade terapêutica contra a tuberculose são inúmeros. Ela é segura, eficaz, pode ser dada em uma única dose, estimula amplamente a resposta imunológica, tem efeito protetor duradouro e pode contribuir significativamente para a diminuição da incidência da doença e talvez a sua erradicação.

REDUÇÃO DO PERÍODO DE TRATAMENTO DA TUBERCULOSE COM O USO DE DROGAS E VACINA DE DNA
Fármacos bactericidas eliminam os bacilos susceptíveis que estão se multiplicando normalmente, mas a alteração da imunidade na tuberculose clínica em humanos impede a destruição adequada dos bacilos remanescentes. Estes organismos seriam responsáveis pela reativação da doença, prolongando o período de tratamento. A associação da imunoterapia com vacina de DNA à quimioterapia convencional teve como objetivo o restabelecimento das funções do sistema imune após a remoção da maior parte dos bacilos. Os mecanismos imunes devem reconhecer e destruir os bacilos persistentes, reduzindo desta forma o período de tratamento da quimioterapia a ser administrada para prevenção de uma re-incidência.

Vários protocolos e esquemas terapêuticos foram usados com quimioterápicos e imunoterápicos como o DNA-hps65, concomitantemente, na tentativa de reduzir o período de tratamento contra a tuberculose. Animais foram infectados por via intravenosa, com aerossol e por via intratraqueal com M. tuberculosis e após estabelecimento da infecção (presença de bacilos no baço, pulmão e fígado) o tratamento consistiu na associação da vacina de DNA-hsp65 com drogas como rifampicina, estreptomicina, isoniazida e pirazinamida. A vacina BCG foi usada para comparação da resposta.

A avaliação foi realizada pela contagem do número de bacilos presentes nos órgãos dos animais, principalmente no pulmão, e estudo da resposta imunológica por dosagens dos mediadores imunológicos, as citocinas. Em um experimento piloto, o uso concomitante da vacina de DNA-hsp65 juntamente com a isoniazida e a pirazinamida foi eficaz e permitiu uma redução significativa (2/3) do período de tratamento dos animais infectados com M. tuberculosis. Os benefícios práticos e estratégicos resultantes do desenvolvimento de vacinas gênicas são inúmeros e absolutamente desejáveis no contexto dos problemas de saúde pública de países em desenvolvimento.

O impacto sobre o controle das doenças infecciosas que podem ser prevenidas por imunização gênica será, provavelmente, uma das aquisições mais importantes advindas do domínio desta nova tecnologia. O desenvolvimento de novas vacinas que evitem, num futuro próximo, o aumento descontrolado de doenças infecciosas é de fundamental importância para a humanidade. Uma vacina de DNA contra a tuberculose contribuirá de maneira significativa para o controle desta doença.

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